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pcr技术有哪些

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高中生物pcr技术要几: 关于PCR的话 首先是原料
原料包括:

缓冲液(一般含Mg2+,促进TaqDAN聚合酶的工作,因为量太少,表面往往加上甘油防止蒸发)

模板(想要扩增的DNA片段)

dNTP(4种脱氧核苷酸,一般都会使用连着3个磷酸基团,即结构类似于ATP而核糖部分是脱氧核糖的脱氧核苷酸,因为高能磷酸键在合成的时候可以断裂提供能量)

引物(根据模板设计的DNA单链片段,一般要注意不能互补,有时候会在上面设计酶切位点以便扩增完成后的操作)

TaqDNA聚合酶(即耐高温DNA聚合酶,最适温度较高,适合PCR的过程)

过程大致包括:
加热变性(使模板链解旋)
退火(使引物结合至模板单链3'端)
延伸(维持一个不是很高的温度使Taq酶从子链5'端开始合成)
循环上述步骤即可使目的基因片段成几何倍数扩增

需要注意:
提取含有目的基因片段的DNA后,引物设计在目的基因两端,即使模板远远长于目的基因片段,也可以大量扩增出目的基因,具体数值x和扩增次数n的关系为x=2^n-2n(n≥3且为整数)

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在生物中PCR技术是什么,有什么样的现实应用: PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。
因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国Mullis首先提出设想,1985年由其发明了聚合酶链反应,即简易DNA扩增法,意味着PCR技术的真正诞生。到如今2013年,PCR已发展到第三代技术。1973 年,台湾科学家钱嘉韵,发现了稳定的Taq DNA聚合酶,为PCR技术发展也做出了基础性贡献。
PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。

高中生物PCR技术中出现的dTNP是什么意思: 高中生物PCR技术中出现的dTNP是什么意思
PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链.
引物I和引物II局部发生碱基互补配对这时引物就不能和单链结合,导致DNA不能合成.
课本中一对碱基互补不影响后续.

PCR技术基本原理:

一、PCR技术基本原理有:

1、PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

2、PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:

①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;

②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;

③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链,重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

二、PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。

扩展资料:

1、PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12)量级的起始待测模板扩增到微克(μg=-6)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中最小检出率为3个细菌。

2、PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。

参考资料:百度百科-PCR

PCR技术与基因测序有什么区别: 区别:对未知序列进行测序,可以通过PCR把整段基因都扩增出来,但是因为现在测序的技术限制,DNA片段两端的序列是测不出来的,直接PCR产物测序的结果只能获得基因中间部分序列。所以利用细菌的T载体进行TA克隆,把基因整合到质粒上扩增,然后用质粒上的引物再PCR,让整个目的基因成为新一轮PCR产物的中间部分,这样再测序就能够获得整个目的的全长序列。另外,PCR扩增平均每1000个碱基就有两个错误,保真性远不及菌体内复制。

PCR技术中 选择引物的条件是什么: ① 引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。② 产物不能形成二级结构。③ 引物长度一般在15~30碱基之间。④ G+C含量在40%~60%之间。⑤ 碱基要随机分布。⑥ 引物自身不能有连续4个碱基的互补。⑦ 引物之间不能有连续4个碱基的互补。⑧ 引物5′端可以修饰。⑨ 引物3′端不可修饰。⑩ 引物3′端要避开密码子的第3位

何谓PCR,包括哪些步骤: PCR分普通PCR和定量PCR, 这个地方应该说的是定量PCR。

一般的定量PCR,是需要先抽提RNA,然后逆转录成cDNA,再开始定量PCR反应。

所谓的一步法,就是把逆转录这个过程,和定量PCR过程,放在一起完成了。抽提完RNA后,一步完成。

PCR技术延伸是怎样终止的?若给出的DNA片段不存在终止子。: 他有上下两个引物,相对而行的,比如abcdefgh,上游引物对应b,复制得bcdefgh,下游引物对应e,当利用上游引物复制的来的片段作模板时,就只能复制到b了,得bcde的目的片段,而该目的片段又继续复制就得了许多片段了

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